V experimentoch bunkovej kultúry sa pipety používajú veľmi často a presnosť ich činnosti priamo ovplyvňuje spoľahlivosť a opakovateľnosť experimentálnych výsledkov. Nasleduje niekoľko tipov na operáciu pipety v bunkovej kultúre, ktoré, ktoré, budú užitočné pre váš experiment.
1. Vyberte správnu pipetu a tip
- Výber pipety: Vyberte správnu pipetu podľa objemu kvapaliny, ktorá sa má preniesť. Normálny rozsah prevádzkového objemu väčšiny pipetov je 10-100% uvedeného rozsahu. Pokúste sa vyhnúť nastaveniu objemu pipety na menej ako 10% maximálneho objemu a použite pipetu s malým dosahom na operácie pipetovania malého objemu.
- Výber tipu: Vyberte tip, ktorý sa zhoduje s pipetou, a uistite sa, že špička je pevne vložená, aby sa predišlo úniku vzduchu. Okrem toho pre špecifické experimenty (napríklad aseptická operácia) by sa mali zvoliť autoklávované tipy.
2. Opláchnite špičku
Opláchnite tip 2-3 časy, aby ste v špičke vytvorili homogénny film, čím sa zlepšila presnosť pipetovania. Okrem toho môže neutralizovať kapilárny efekt v mikropipetoch, vďaka čomu môže teplota vo vnútri špičky konzistentná s teplotou vzorky pre veľké objemové pipetovanie. Je potrebné poznamenať, že opláchnutie môže mať nepriaznivý vplyv na výsledky pri pipetovaní horúcich a studených roztokov.
3. Ovládajte rýchlosť aspirácie a výdaj
- Hladké stlačenie: Stlačte a uvoľnite tlačidlo ovládača hladko a nepretržite, namiesto toho, aby ste ho náhle stlačili a uvoľňovali. To sa môže vyhnúť tvorbe bublín a zlepšiť presnosť pipetovania.
- Pauza: Po aspirácii tekutiny nechajte špičku v tekutine asi 1 sekundu, najmä pre tieto viskózne kvapaliny. Okamžite vytiahnutie špičky môže mať za následok neúplnú tekutú aspiráciu.
4. Venujte pozornosť hĺbke ponorenia špičky
- Mikropipette: Tip by mal byť ponorený 2-3 mm.
- Pipeta s veľkým dosahom: Hĺbka ponorenia by mala byť 5-6 mm. Ak je hrot ponorený príliš hlboko, vzduch vo vnútri špičky bude stlačený, čo spôsobí príliš veľa tekutiny. Kvapalina zostávajúca na povrchu špičky môže tiež ovplyvniť výsledky.
5. Vertikálna prevádzka
Ponotujte pipetu do vzorky čo najskoršie, najlepšie bez toho, aby ste sa odchytili od vertikálnej polohy o viac ako 20 stupňov. Okrem zlepšenia presnosti objemu pipety to môže tiež zabrániť tomu, aby tekutina prúdila do pipety v dôsledku nadmerného naklonenia.
6. Pozorujte špičku pipety
Pri príprave na vybíjanie tekutiny venujte pozornosť tomu, či sú na povrch špičky pipety pripevnené prebytočné kvapky. Po vypustení kvapaliny sa môže špička špičky pipety dotknúť na strane nádoby, aby sa zabezpečilo, že výtok je dostatočne dôkladný, aby sa zabránilo zostávajúcemu poslednej kvapke kvapaliny na špičke špičky pipety.
7. Vyberte príslušnú metódu pipetovania
- Metóda pozitívnej sacieho: Vhodný pre väčšinu tekutín. Pri saní tekutiny stlačte tlačidlo do prvého bodu zastavenia a potom pomaly uvoľnite tlačidlo, aby ste sa vrátili do počiatočného bodu. Potom stlačte tlačidlo do prvého bodu zastavenia, aby ste vypustili tekutinu, na chvíľu sa pozastavte a pokračujte v stlačení tlačidla do druhého bodu zastavenia, aby ste vyhodili zostávajúcu tekutinu. Nakoniec uvoľnite tlačidlo.
- Metóda spätného sacie: Vhodné pre vysoko viskózne kvapaliny, biologicky aktívne kvapaliny, ľahko penivé kvapaliny alebo extrémne malé množstvá kvapalín. Najprv nasajte viac tekutiny ako rozsah nastavenia a pri prenose tekutiny nevyfúknite zvyšnú tekutinu.
8. Pipetu udržiavajte čistú a udržiavanú
- Pravidelná kalibrácia: Po použití pipety na určitý čas je potrebné kalibrovať, aby sa zabezpečila jeho presnosť.
- Čistenie: Po každom použití by sa pipeta mala vyčistiť v čase, aby sa zabránilo zvyškovej tekutine z kontaminácie ďalšieho experimentu.
9. Aseptická prevádzka
V bunkovej kultúre je aseptická operácia veľmi dôležitá. Pri použití pipety venujte pozornosť nasledujúcim bodom:
- Dezinfekcia: Pred použitím utrite pipetu a špičku s alkoholovou bavlnenou guľou na dezinfekciu.
- Vyhnite sa krížovej kontaminácii: Použite nový tip pre každú vzorku, aby ste predišli krížovej kontaminácii.
S vyššie uvedenými tipmi môžete použiť pipety na experimenty v bunkovej kultúre presnejšie a efektívnejšie a zlepšiť spoľahlivosť a opakovateľnosť experimentálnych výsledkov. Dúfam, že vám tieto tipy pomôžu!